Gramovo barvení je nejpoužívanější barvení v mikrobiologii. Informuje o počtu a tvaru bakterií, jejich uspořádání a barvitelnosti dle Grama, což má diagnostický význam. Rozliší bakterie na grampozitivní (modré) a gramnegativní (červené).
Princip:
Vytvořený komplex krystalové violeti a Lugolova roztoku po oplachu alkoholem zůstává pouze v grampozitivních bakteriích, z gramnegativních bakterií se alkoholem vymyje. Toto je dáno odlišnostmi ve stavbě stěny grampozitivních a gramnegativních bakterií. Gramnegativní bakterie jsou po oplachu alkoholem bezbarvé a musí se kontrastně dobarvit, např. karbolfuchsinem.
Postup:
- Označíme podložní sklo a sterilizujeme jej.
- Naneseme suspenzi bakterií.
- Po zaschnutí suspenze provedeme fixaci preparátu protažením podložního skla plamenem kahanu.
- Převrstvíme barvicím roztokem v tomto sledu:
- krystalová violeť,
- Lugolův roztok,
- oplach vodou,
- odbarvení alkoholem,
- oplach vodou,
- dobarvení zředěným karbolfuchsinem,
- oplach vodou.
- Prohlížíme v mikroskopu - imerzní systém, zvětšení 1000x.
Hodnocení:
Je-li preparát připraven z bakteriální kultury, popisujeme tvar bakterií, jejich uspořádání a barvitelnost podle Grama. Jde-li o směs, popisujeme nejprve grampozitivní koky a tyčinky, potom gramnegativní koky a tyčinky, pak ostatní mikroorganizmy.
Je-li preparát z infekčního materiálu, popisujeme nejprve buněčné elementy, pak nebuněčné složky a poté bakterie. Nález bakterií se vyjadřuje kvantitativně.
Animace Gramovo barvení
Video Gramovo barvení